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“OD值”這個(gè)概念想必做實(shí)驗(yàn)的各位小伙伴們都不陌生,從判斷提取核酸的質(zhì)量及濃度,到BCA蛋白定量進(jìn)行蛋白定量,又或者是ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)目的蛋白含量,這些常用的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)都需要檢測(cè)樣品的“OD值”,但是,“OD值”到底是什么,我們?cè)跍y(cè)量“OD值”的時(shí)候又有哪些需要注意的問題,今天就讓小編給小伙伴們好好說道說道。什么是“OD”值?
蛋白磷酸化是一種非常重要的翻譯后加工,做信號(hào)通路必然是要檢測(cè)蛋白磷酸化的,Western blot是評(píng)估蛋白磷酸化狀態(tài)的最常用方法,其實(shí)和跑正常蛋白沒什么出入,只不過孵育的是識(shí)別磷酸化的抗體。下面恒遠(yuǎn)生物帶大家總結(jié)一下實(shí)驗(yàn)中的注意要點(diǎn)。
抗體(antibody,Ab)是機(jī)體在體內(nèi)存在的外來分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下,由B淋巴細(xì)胞或記憶細(xì)胞增殖分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig),主要分布在血清中,也分布于組織液及外分泌液中。
原代細(xì)胞(primary cell)是指從機(jī)體的組織中經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得、并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞,稱為原代細(xì)胞。一般認(rèn)為,培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。
在ELISA檢測(cè)系統(tǒng)的關(guān)鍵要素中,包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別,所以保留抗原很重要,elisa試劑盒我做重組蛋白時(shí),一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。封鎖就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時(shí)因?yàn)樵囼?yàn)的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。
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